Cell Freezing Medium (1x)

Catalog Number：PZ110R

01/產(chǎn)品概述

細(xì)胞凍存是將細(xì)胞放在低溫環(huán)境，減少細(xì)胞代謝，以便長期儲存的一種技術(shù)，是細(xì)胞長期保存的重要手段。細(xì)胞凍存液通過冷凍保護(hù)劑在凍存過程中對細(xì)胞進(jìn)行保護(hù)，以減少或防止冷凍冰晶對細(xì)胞造成的損傷。

LeapWal 無血清細(xì)胞凍存液 Cell Freezing Medium (1x) 是立譜沃生物自主研發(fā)的一款無血清、無需程序降溫的細(xì)胞凍存液，廣泛適用于多種哺乳動(dòng)物細(xì)胞的凍存。該凍存液特別優(yōu)化的配方含有雙重保護(hù)細(xì)胞的成份，從細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞外同時(shí)保護(hù)細(xì)胞免受凍存時(shí)冰晶的損傷，大大提高了細(xì)胞的復(fù)蘇率和活力，可用于細(xì)胞長期保存。該產(chǎn)品配方成分明確，不含動(dòng)物來源性蛋白，不含血清，可減少各類細(xì)菌、病毒和支原體等污染，保證凍存細(xì)胞的安全。

與傳統(tǒng)凍存液相比，本產(chǎn)品不僅可以避免使用血清，降低血清中未知成分和病毒等感染物質(zhì)給凍存帶來的影響與風(fēng)險(xiǎn)，同時(shí)，可省去繁瑣費(fèi)時(shí)的程序降溫過程，細(xì)胞可重懸于本產(chǎn)品后直接置于-80℃冰箱長期保存，或次日轉(zhuǎn)移到液氮完成整個(gè)凍存過程。

02/產(chǎn)品組分

03/保存條件

冰袋（wet ice）運(yùn)輸。4℃保存，有效期6個(gè)月。若長期不用，可-30℃至-10℃保存，有效期24個(gè)月。

04/產(chǎn)品特點(diǎn)

1. 即用型細(xì)胞凍存液，無需程序降溫，直接凍存于-80℃冰箱，長期保存（>5年）

2. 安全性高，無動(dòng)物源性蛋白，不含血清，病毒、病菌和支原體等污染可能性低

3. 凍存細(xì)胞復(fù)蘇率高達(dá)90% 以上，細(xì)胞活力好

4. 成分明確，極大降低批次間差異

05/實(shí)驗(yàn)流程概要

06/實(shí)驗(yàn)步驟

一：細(xì)胞凍存步驟

1. 選擇處于對數(shù)生長期的細(xì)胞，按照常規(guī)方法收集貼壁細(xì)胞或懸浮細(xì)胞于離心管中。

2. 1000 rpm-2000 rpm，離心5分鐘，收集培養(yǎng)細(xì)胞沉淀，棄上清液。

3. 加入適量4℃預(yù)冷的LeapWal Cell Freezing Medium (1x) 重懸細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液。

? 按照細(xì)胞密度和所用細(xì)胞凍存管的尺寸計(jì)算所需凍存液的量，推薦凍存密度：1x10⁶至5x10⁶cells/mL。

4. 將細(xì)胞懸液分裝至已標(biāo)記的凍存管中，建議每管1mL或1.5mL。

5. 直接將細(xì)胞凍存管放入-80℃超低溫冰箱中，可長期冷凍保存。如果想放入液氮中長期保存，需先放入-80℃冰箱至少12小時(shí)，方可移至液氮罐中長期保存。

二：凍存細(xì)胞復(fù)蘇步驟

1. 在15 mL離心管中加入5-10 mL平衡至室溫的*培養(yǎng)基。

2. 從-80℃冰箱/液氮中取出凍存的細(xì)胞，立即放入37℃水浴鍋或其他細(xì)胞復(fù)蘇設(shè)備中，迅速解凍。

3. 將凍存管中的細(xì)胞懸液逐滴轉(zhuǎn)移至預(yù)先準(zhǔn)備好的含*培養(yǎng)基的離心管中，1000 rpm-1500 rpm，離心5分鐘，收集細(xì)胞沉淀，棄上清（操作時(shí)小心，切勿將細(xì)胞沉淀移去）。

4. 加入適量平衡至室溫的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，接種到事先準(zhǔn)備好的培養(yǎng)容器中，輕輕搖晃培養(yǎng)容器，使細(xì)胞分布均勻。

5. 鏡檢細(xì)胞后，可根據(jù)各自研究的需要和方法經(jīng)行細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)。培養(yǎng)5-24h后，觀察細(xì)胞狀態(tài)，可視情況更換新鮮細(xì)胞培養(yǎng)液。

07/適用范圍

廣泛適用于多種哺乳動(dòng)物細(xì)胞的凍存。無需程序降溫，-80℃可長期保存（>5年），細(xì)胞存活率在90% 以上。

08/質(zhì)量控制

LeapWal 無血清細(xì)胞凍存液均已通過嚴(yán)格的內(nèi)毒素、滲透壓、pH測試和無菌檢測（細(xì)菌、真菌和支原體檢測）。

09/注意事項(xiàng)

1. 若長期不用，本產(chǎn)品可-30℃至-10℃保存，再次使用時(shí)，請?jiān)?-8℃或室溫（22-25℃，不超過4小時(shí)）融化LeapWal Cell Freezing Medium，避免反復(fù)凍融；

2. 使用LeapWal Cell Freezing Medium凍存細(xì)胞后，應(yīng)盡量減少凍存細(xì)胞在外存放時(shí)間，盡快移入-80℃超低溫冰箱長期保存；

3. LeapWal Cell Freezing Medium含有DMSO，部分對DMSO敏感的細(xì)胞、淋巴細(xì)胞或干細(xì)胞凍存，建議使用本產(chǎn)品對其進(jìn)行試驗(yàn)性凍存、復(fù)蘇、培養(yǎng)，確認(rèn)性能后再進(jìn)行正式凍存；

4. 該產(chǎn)品在室溫條件下放置的時(shí)間不宜過長，以免影響凍存效率；

5. 免責(zé)聲明: 本公司將不為任何不正當(dāng)使用此產(chǎn)品所發(fā)生的意外負(fù)責(zé)；

6. 為了您的健康安全，請規(guī)范操作，穿戴實(shí)驗(yàn)服與手套開展實(shí)驗(yàn)；

7. 本產(chǎn)品僅供科研使用，請勿用于臨床診斷及治療。

10/實(shí)驗(yàn)案例分析

1. 選擇處于對數(shù)生長期的四種細(xì)胞，按照常規(guī)方法收集細(xì)胞于離心管中。

2. 1000 rpm，離心5分鐘，收集培養(yǎng)細(xì)胞沉淀，棄上清液。

3. 加入適量4℃預(yù)冷的LeapWal Cell Freezing Medium 、T公司凍存液、X公司凍存液分別重懸細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液。凍存密度為1x10⁶ cells/mL。

4. 將細(xì)胞懸液分裝至已標(biāo)記的凍存管中，每管1mL，放入-80℃冰箱中，冷凍保存。

5. 凍存6個(gè)月后，進(jìn)行細(xì)胞復(fù)蘇，對復(fù)蘇后的細(xì)胞進(jìn)行臺盼藍(lán)染色，統(tǒng)計(jì)細(xì)胞存活率。

圖2: 細(xì)胞凍存6個(gè)月后復(fù)蘇，對復(fù)蘇后的細(xì)胞進(jìn)行臺盼藍(lán)染色，統(tǒng)計(jì)細(xì)胞存活率

11/其他相關(guān)產(chǎn)品