考馬斯亮藍(lán)快速染液(Commassie Blue Fast Staining Solution)是以考馬斯亮藍(lán)G250為染料,可用于SDS-PAGE或非變性PAGE等蛋白電泳膠的快速、高靈敏染色,或Western轉(zhuǎn)膜后PAGE膠上殘余蛋白的檢測。是一種無毒,無刺激性氣味的高度環(huán)保型染色液。該染色液只需一小時(shí)或更短時(shí)間就可以檢測到低達(dá)100mg的蛋白電泳條帶,而常規(guī)方法需3小時(shí)以上。本試劑盒可以進(jìn)行高靈敏染色,可以清楚檢測到10mg的蛋白電泳條帶。
考馬斯亮藍(lán)快速染液操作步驟(僅供參考):
1、PAGE電泳結(jié)束后取凝膠放入約蒸餾水中,在搖床上搖動(dòng),棄液,重復(fù)上述步驟1次。
2、棄蒸餾水,加入Commassie Blue Fast stai ning solution,使染色液能蓋住凝膠。
3、(可選)凝膠置于考馬斯亮藍(lán)快速染色液中,在水浴鍋或微波爐內(nèi)加熱至95~100弋,立即從加熱裝置中取出。(此步驟可以使染色提高靈敏度或加快染色進(jìn)程,亦可省略。)
4、在搖床上搖動(dòng)染色,蛋白量大的條帶10-15min左右會(huì)出現(xiàn),大部分蛋白條帶會(huì)在30-60min左右出現(xiàn)。一般情況下,5h能獲得效果。
5、出現(xiàn)清晰的目標(biāo)蛋白條帶即可停止染色,棄染色液。
6、加入適量的蒸餾水停止染色反應(yīng)。亦可以在搖床上搖動(dòng)脫色,以便減少背景干擾。
7、把凝膠保存在水中,用于后續(xù)的拍照等。保存在水中的凝膠會(huì)發(fā)生溶漲。如需避免溶漲,可以把膠保存在含20%甘油水溶液中,長期保存可以制備干膠。
凝膠采用蒸餾水清洗的目的在于去除凝膠中的SDS等干擾物質(zhì)。如果不能充分去除SDS會(huì)導(dǎo)致背景較高。如果凝膠很厚,洗滌時(shí)間應(yīng)適當(dāng)延長、洗滌次數(shù)應(yīng)適當(dāng)增加。蒸餾水洗滌去除凝膠中的雜質(zhì)時(shí),如果使用經(jīng)過加熱或沸騰的蒸餾水,每次洗滌時(shí)間可以縮短至1~2min。染色時(shí)如果把凝膠和染色液一起放置在微波爐中適當(dāng)加熱,可以大大加快染色速度。但加熱時(shí)宜盡量避免沸騰,以免出現(xiàn)因暴沸而導(dǎo)致的凝膠碎裂。